

ER-Tracker Red內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針(活細(xì)胞成像用)產(chǎn)品簡介
ER-Tracker探針是一系列具有細(xì)胞膜透過性,對活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針,不像傳統(tǒng)的DiOC6(3),該系列探針幾乎不對線粒體著色,且在較低濃度即可實(shí)現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色,且對細(xì)胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細(xì)胞染色后用醛固定,可以部分保留活細(xì)胞的染色特征。
本品為,由紅色熒光染料BODIPY® TR和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成,其Ex= 587 nm,Em= 615 nm。格列ben脲(Glibenclamide, glyburide),一種常用降血糖藥物,在胰島β細(xì)胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細(xì)胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列ben脲高度結(jié)合ATP-敏感型K+通道的磺脲受體,且本受體富集存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,因此適合用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針。
本品為溶于DMSO的1 mM 濃度ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)儲(chǔ)存液,推薦工作濃度為~1 μM。我司還提供了ER-Tracker Red 稀釋液,使ER-Tracker Red的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋,每10µl可以配制10ml ER-Tracker Red工作液;按照1:3000的比例稀釋,每10µl可以配制30ml ER-Tracker Red工作液。
產(chǎn)品組成
名稱 編 號 |
FS1342-20ul |
FS1342-100ul |
Storage |
ER-Tracker Red內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針 | 20ul | 20ul | -20℃干燥 |
ER-Tracker Red稀釋液 | 60ml | 250ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | ||
基本特性
分子式(Formula):C44H42BClF2N6O7S2
分子量(Molecular Weight):915.23
Ex/Em:587/615 nm
圖1.ER-Tracker Red內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針(活細(xì)胞成像用)激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。
濾片(Filter):TRITC
外觀(Appearance):液體
結(jié)構(gòu)式:
圖1.ER-Tracker Red的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
溶解性:溶于DMSO(1mM)
運(yùn)輸儲(chǔ)存條件:冰袋運(yùn)輸。≤-20℃避光干燥保存,至少六個(gè)月有效。避免反復(fù)凍融。
ER-Tracker Red內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針(活細(xì)胞成像用)使用方法(以下步驟僅做參考,具體請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整。)
使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進(jìn)行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。
1、ER-Tracker Red工作液的配制:
(1).取少量ER-Tracker Red按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Red 稀釋液中。例如取1μl ER-Tracker Red加入到1ml ER-Tracker Red 稀釋液中。混勻后即為ER-Tracker Red工作液。
(2).ER-Tracker Red工作液使用前需37℃預(yù)溫育。
[注]:工作液中ER-Tracker Red的濃度可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為1:1000-1:3000。為降低背景,在染色效果可以接受的范圍內(nèi),建議盡量使用較低濃度的ER-Tracker Red。
2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光標(biāo)記:
(1).去除細(xì)胞培養(yǎng)液,用適量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks' Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)(CAT#FS0395)洗滌生長在蓋玻片上的細(xì)胞。
(2).去除洗滌液,加入步驟1配制好的并37℃預(yù)溫育的ER-Tracker Red染色工作液,與細(xì)胞37℃共孵育15-30分鐘。
(3).去除ER-Tracker Red染色工作液,用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1-2次。
(4).隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。此時(shí)可觀察到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈明亮的強(qiáng)熒光染色。
(5).如果經(jīng)ER-Tracker Red染色后的細(xì)胞需要進(jìn)行固定,可以使用4%甲醛37℃固定2分鐘。固定后用適當(dāng)?shù)南礈煲合礈?/span>2-3次,每次5分鐘,隨后可以進(jìn)行復(fù)染或滴加適當(dāng)?shù)目篃晒獯銣绶馄海詈蠓馄^察。
[注]:ER-Tracker Red染色的細(xì)胞不能用Triton X-100通透,Triton X-100通透處理會(huì)導(dǎo)致ER-Tracker Red的熒光染色消失。
注意事項(xiàng)
(1)熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
(2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
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常見問題及解答FAQ
Q: 請問HBSS 里面的鈣鎂離子在里面起到什么作用?
A: 有利于維持細(xì)胞狀態(tài),利于后續(xù)的染色。
Q: 請問固定后的死細(xì)胞還能染上嗎?
A: 該探針主要染的是活細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),固定樣本基本染不上色。
Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎?
A: 活細(xì)胞的染色,不需要加抗熒光淬滅封片液。
Q: 固定后的熒光還會(huì)淬滅么?或者說可以維持多長時(shí)間?
A: ER-Tracker Red 按照后附的使用說明染色后,用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留, 熒光均會(huì)有淬滅的現(xiàn)象的。具體的熒光維持時(shí)間這邊沒有具體數(shù)據(jù)可參考。
Q: 請問 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同時(shí)染還是分開依次染,染完后熒光可持續(xù)多久(也就是在多長時(shí)間內(nèi)還可以檢測)?
A: 建議分開依次染色,熒光均存在淬滅的現(xiàn)象,染色完建議盡快在1-2h內(nèi)完成檢測。